cDNA名詞解釋:cDNA(互補(bǔ)DNA)是一種互補(bǔ)的脫氧核糖核酸。與mRNA鏈互補(bǔ)的單鏈DNA,是在適當(dāng)?shù)囊锎嬖谙拢蒻RNA和DNA在一定條件下合成的,稱為cDNA。
一、cDNA簡(jiǎn)介
cDNA是指具有與RNA鏈互補(bǔ)的堿基序列的DNA。與RNA鏈互補(bǔ)的單鏈DNA是由RNA依賴型DNA聚合酶(逆轉(zhuǎn)錄酶)在合適的引物存在下合成的,雙鏈cDNA是由DNA依賴型DNA聚合酶或RNA依賴型DNA聚合酶以單鏈cDNA為模板,合成單鏈cDNA并經(jīng)堿處理去除其對(duì)應(yīng)的RNA后合成的。這種情況下,mRNA的cDNA與原始基因組DNA相同,沒(méi)有內(nèi)含子;相反,它對(duì)應(yīng)于3 & # 39;其不存在于原始基因中,但存在于mRNA中。mRNA結(jié)構(gòu)與外顯子序列、前導(dǎo)序列和后續(xù)序列一起反映在核苷序列上,如聚腺苷酸序列。
二、制備cDNA
為了制備互補(bǔ)的DNA,通常需要首先分離從靶基因轉(zhuǎn)錄的mRNA。如果這個(gè)基因編碼的蛋白質(zhì)是細(xì)胞中的主要蛋白質(zhì),那么這個(gè)基因的產(chǎn)物就是總mRNA的主要成分。就胰島B細(xì)胞而言,這種細(xì)胞含有高水平的胰島素前體基因,有時(shí)會(huì)沉淀正在翻譯的基因的核糖核蛋白。如果表達(dá)的蛋白質(zhì)(抗原)與特異性抗體結(jié)合,胰島素特異性mRNA可以從沉淀的核糖體中分離出來(lái),一般特異性mRNA只是細(xì)胞總mRNA的一小部分。在這種情況下,總的mRNA必須通過(guò)密度梯度離心根據(jù)分子量進(jìn)行分離,然后將分離的mRNA直接用于在試管中表達(dá)蛋白質(zhì)(兔網(wǎng)織紅細(xì)胞的裂解物或小麥胚芽提取物用作翻譯系統(tǒng)的誘導(dǎo)劑),然后通過(guò)免疫沉淀或聚丙烯酰胺凝膠電泳從許多表達(dá)的蛋白質(zhì)中確定目標(biāo)蛋白質(zhì),從而確定表達(dá)蛋白質(zhì)的特定mRNA。
三、cDNA克隆
cDNA cloing是與RNA互補(bǔ)的雙鏈DNA片段,可以攜帶在克隆載體中。常用來(lái)克隆真核生物的基因拷貝。由于cDNA外殼是信息分子的成熟拷貝,沒(méi)有內(nèi)含子序列。如果一個(gè)合適的運(yùn)動(dòng)序列與其克隆的集合相連,它可以在任何宿主中快速表達(dá)。
文章標(biāo)題:cdna名詞解釋
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